Hepatito C viruso (HCV), kor, NS3, NS4, NS5 antigenai, IgG antikūnai

Share Tweet Pin it

Kepenų nugalimas su C tipo virusu yra viena iš svarbiausių infekcinių ligų specialistų ir hepatologų problemų. Dėl ligos būdingas ilgas inkubacinis laikotarpis, kurio metu nėra klinikinių simptomų. Šiuo metu HCV vežėjas yra labiausiai pavojingas, nes nežino apie jo ligą ir gali užkrėsti sveikus žmones.

Pirmą kartą apie virusą pradėjo kalbėti XX a. Pabaigoje, po kurio prasidėjo jos išsamūs tyrimai. Šiandien ji žinoma apie šešias formas ir daugybę potipių. Toks struktūros kintamumas yra dėl patogeno mutacijos.

Infekcinių-uždegiminių procesų vystymasis kepenyse yra hepatocitų (jo ląstelių) sunaikinimas. Jie sunaikinami tiesiogiai paveikus virusą, turintį citotoksinį poveikį. Vienintelė galimybė identifikuoti patogeninį agentą ikiklinikinėje stadijoje yra laboratorinė diagnozė, apimanti antikūnų ir genetinio viruso rinkinio paiešką.

Kas yra hepatito C antikūnų kraujyje?

Asmuo, kuris toli gražu nėra vaistas, sunku suprasti laboratorinių tyrimų rezultatus, neturintys idėjos apie antikūnus. Faktas yra tas, kad patogeno sudėtį sudaro baltymų komponentų kompleksas. Įvesdami kūną, jie sukelia imuninę sistemą reaguoti, tarsi ją erzina jos buvimas. Taigi prasideda antikūnų prieš hepatito C antigenų gamyba.

Jie gali būti kelių tipų. Dėl kokybinės sudėties įvertinimo gydytojas sugeba įtarti asmens infekciją, taip pat nustatyti ligos stadiją (įskaitant susigrąžinimą).

Pagrindinis hepatito C antikūnų nustatymo metodas yra imunologinis tyrimas. Jo tikslas yra ieškoti specifinių Ig, kurie sintezuojami reaguojant į infekcijos įsiskverbimą į kūną. Atkreipkite dėmesį, kad ELISA leidžia įtarti ligą, po kurios reikia tolesnės polimerazės grandininės reakcijos.

Antikūnai, net ir po to, kai visiškai perimta virusu, likusį gyvenimą lieka žmogaus krauju ir rodo praeinamąjį imuniteto kontaktą su patogeniu.

Ligos etapai

Hepatito C antikūnai gali parodyti infekcinių ir uždegiminių procesų etapą, kuris padeda specialistui pasirinkti veiksmingus antivirusinius vaistus ir stebėti pokyčių dinamiką. Yra du ligos etapai:

  • latentinis. Asmuo neturi jokių klinikinių simptomų, nepaisant to, kad jis jau yra viruso nešiotojas. Tuo pat metu antikūnų (IgG) testas prieš hepatitą C bus teigiamas. RNR ir IgG lygis yra nedidelis.
  • ūminis - būdingas antikūnų titras, ypač IgG ir IgM, padidėjimas, o tai rodo intensyvų patogenų dauginimąsi ir ryškų hepatocitų sunaikinimą. Jų sunaikinimą patvirtina kepenų fermentų (ALT, AST) augimas, kuris atskleidžia biochemija. Be to, RNR patogeniniuose agentuose yra didelė koncentracija.

Teigiamą gydymo fono dinamiką patvirtina viruso apkrova. Atsigavus, pasekmės agento RNR neaptiktos, lieka tik G imunoglobulinai, kurie rodo perduotą ligą.

ELISA požymiai

Daugeliu atvejų imunitetas negali susidoroti su pačiu patogeniu, nes jame nėra galingo atsakymo. Taip atsitiko dėl viruso struktūros pasikeitimo, dėl kurio gaminami antikūnai yra neveiksmingi.

Paprastai ELISA yra nustatytas keletą kartų, nes yra galimas neigiamas rezultatas (ligos pradžioje) arba klaidingai teigiamas (nėščioms moterims su autoimunine patologija ar anti-ŽIV gydymu).

Norint patvirtinti arba paneigti ELISA atsaką, būtina jį iš naujo atlikti po mėnesio, taip pat paaukoti kraują PCR ir biocheminiams tyrimams.

Ištirti antikūnai prieš hepatito C virusą:

  1. švirkščiamųjų narkotikų vartotojai;
  2. pacientams, sergantiems kepenų ciroze;
  3. jei nėščia yra nešiotojo virusas. Šiuo atveju motina ir kūdikis yra tikrinami. Infekcijos rizika svyruoja nuo 5% iki 25%, priklausomai nuo viruso kiekio ir ligos aktyvumo;
  4. po nesaugių lytinių santykių. Viruso perdavimo tikimybė neviršija 5%, tačiau su žaizdomis genitalijų gleivinės, homoseksualų, taip pat dažnai pasikeitusių partnerių mėgėjams rizika yra daug didesnė;
  5. po tatuiruočių ir auskarų vėrimo;
  6. apsilankę grožio salonuose su bloga reputacija, nes infekcija gali atsirasti dėl užterštų priemonių;
  7. prieš duoti kraują, jei žmogus nori tapti donoru;
  8. paramedicinos;
  9. įlaipinimo darbuotojai;
  10. neseniai išleista iš MLS;
  11. jei nustatomas kepenų fermentų (ALT, AST) padidėjimas, siekiant pašalinti organų sukeliamą viruso pažeidimą;
  12. artimai bendraujant su viruso nešėja;
  13. pacientams, sergantiems hepatosplenomegalija (padidėjęs kepenų ir blužnies kiekis);
  14. ŽIV infekuota;
  15. asmuo su odos geltonumais, delnų hiperpigmentacija, lėtinis nuovargis ir skausmas kepenyse;
  16. prieš planuojamą chirurgą;
  17. planuojant nėštumą;
  18. ultragarsu aptiktų žmonių, turinčių kepenų struktūrinių pokyčių.

Fermentinis imunologinis tyrimas naudojamas kaip atranka masinei žmonių atrankai ir virusų nešiotojų paieškai. Tai padeda užkirsti kelią infekcinės ligos protrūkiui. Pradinis hepatito gydymo etapas yra daug veiksmingesnis nei gydant kepenų cirozės fone.

Antikūnų rūšys

Norint tinkamai interpretuoti laboratorinės diagnostikos rezultatus, reikia žinoti, kokie yra antikūnai ir ką jie gali reikšti:

  1. Anti-HCV IgG yra pagrindinis antigenų tipas, kurį sudaro imunoglobulinai G. Jie gali būti nustatyti pradinio asmens tyrimo metu, kuris leidžia įtarti ligą. Jei atsakymas yra teigiamas, verta galvoti apie vangų infekcinį procesą ar imuniteto kontaktą su virusais praeityje. Pacientui reikia papildomos diagnozės, naudojant PGR;
  2. anti-HCVcoreIgM. Šis tipo žymeklis reiškia "patogeninių agentų antikūnus prieš branduolines struktūras". Jie pasirodo netrukus po infekcijos ir rodo ūminę ligą. Tito padidėjimas pastebimas, kai imuninės gynybos stiprumas ir virusų aktyvacija sumažėja lėtiniu ligos eigoje. Kai remisija yra silpnai teigiamas žymeklis;
  3. anti-HCV kiekis - bendras antibiotikų, susidedančių iš patogenų struktūrinių baltyminių junginių, rodiklis. Dažnai tai leidžia jam tiksliai diagnozuoti patologijos stadiją. Laboratoriniai tyrimai tampa informatyvūs po 1-1,5 mėnesio nuo HCV skverbimosi į kūną momento. Iš viso hepatito C viruso antikūnų yra imunoglobulino M ir G analizė. Jų augimas pastebimas vidutiniškai po 8 savaičių po infekcijos. Jie išlieka gyvybei ir nurodo praeinančią ligą ar jos lėtinį kurą;
  4. anti-HCVNS. Šis indikatorius yra antikūnas nekonstrukciniams patogeno baltymams. Tai apima NS3, NS4 ir NS5. Pirmasis tipas yra aptiktas ligos pradžioje ir rodo imuniteto sąlytį su HCV. Tai yra infekcijos rodiklis. Ilgalaikis jo aukšto lygio išlaikymas yra netiesioginis viruso uždegiminio proceso kepenų ligos simptomas. Vėlyvoje hepatito stadijoje nustatyti antikūnai prie likusių dviejų baltymų struktūrų tipų. NS4 yra organų pažeidimo masto indikatorius, o NS5 rodo lėtinę ligos eigą. Sumažinti jų titrus galima laikyti atsisakymo pradžia. Atsižvelgiant į didelę laboratorinių tyrimų kainą, praktiškai ji naudojama retai.

Yra ir kitas žymeklis - tai yra HCV-RNR, kuris apima genetinio patogeno rinkinio kraujyje paiešką. Priklausomai nuo viruso apkrovos, infekcijos nešėjas gali būti daugiau ar mažiau užkrečiamas. Tyrimui naudojamos didelės jautrumo bandymo sistemos, leidžiančios nustatyti patogeninį agentą ikiklinikinėje stadijoje. Be to, PCR pagalba infekcija gali būti aptikta toje stadijoje, kai antikūnų vis dar nėra.

Antikūnų pasirodymo kraujyje laikas

Svarbu suprasti, kad antikūnai atsiranda skirtingais laikais, kurie leidžia tiksliau nustatyti infekcinių ir uždegiminių procesų stadiją, įvertinti komplikacijų riziką, taip pat įtariamą hepatitą vystymosi pradžioje.

Antruoju infekcijos mėnesiu imunoglobulinai pradeda registruotis kraujyje. Per pirmąsias 6 savaites IgM lygis sparčiai didėja. Tai rodo ūmią ligos eigą ir didelį viruso aktyvumą. Pasibaigus jų koncentracijos aukščiui, pastebimas jo sumažėjimas, kuris rodo kito fazės ligos pradžią.

Jei nustatoma G klasės antikūnų prieš hepatitui C, verta įtarti, kad pasibaigia ūminė stadija ir patologija pereinama prie lėtinės. Jie nustatomi po trijų mėnesių nuo infekcijos kūno metu.

Kartais antikūnus galima išskirti antrą ligos mėnesį.

Kalbant apie anti-NS3, jie nustatomi ankstyvoje serokonversijos stadijoje, o anti-NS4 ir-NS5 - vėliau.

Dekodavimo tyrimai

Imunoglobulinų aptikimui ELISA metodu nustatyti. Tai pagrįsta antigeno antikūnų reakcija, kuri vyksta veikiant specialiems fermentams.

Paprastai bendras indeksas kraujyje nėra registruojamas. Kiekybiniam antikūnų vertinimui buvo naudojamas teigiamumo koeficientas "R". Tai rodo tiriamo žymens tankį biologinėje medžiagoje. Jos pamatinės vertės svyruoja nuo nulio iki 0,8. 0,8-1 diapazonas rodo abejotiną diagnozavimo atsaką ir reikalauja tolesnio paciento tyrimo. Teigiamas rezultatas yra laikomas, kai R vienetai yra viršyti.

Hepatito C antigenai

Šiandien yra žinoma ne mažiau kaip 10 struktūrinių ir nesteroidinių baltymų, užkoduotų HCV genomu. Struktūriniai baltymai apima šerdį, apvalkalo 1 ir apvalkalo 2. Pagrindinis baltymas yra nukleokokapsido baltymas, o apvertimas 1 ir apvyniojimas 2 yra viruso išorinio apvalkalo glikoproteinai. P7 baltymas taip pat koduojamas struktūrinėje zonoje, kurios funkcija nėra aiški, tačiau analogija su kitais Flaviviridae šeimos nariais rodo, kad jo funkcija yra susijusi su viruso išleidimu iš užkrėstos ląstelės.
Šis baltymas yra suskaidytas ląstelių peptidase iš apvalkalo 2, bet ne visais atvejais, o tai reiškia, kad egzistuoja apvyniojimas 2, kuris yra dviejų artimiausių formų.

HCV genomo nesteroidinis regionas koduoja 6 baltymus - NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A ir NS5B. NS2 baltymas yra metalo priklausoma virusinė proteinazė. NS4A baltymas veikia kaip NS3 proteolitinio aktyvumo NS3 / NS4B, NS4B / NS5A, NS5A / NS5B viruso poliproteinų pjaustymo vietose efektorius arba kofaktorius.

Šiuo metu fermentinių imunofermentinių bandymų sistemų projektuojant antigenus naudojami struktūriniai ir nestruktūriniai baltymai, gaunami genetine inžinerija (rekombinantiniai baltymai) arba cheminė sintezė. Pirmosios kartos fermentų imuninės analizės sistemos pasirodė rinkoje 1989 m. Ir buvo pagrįstos tiesiogine ELISA. Kaip imunosorbentas, buvo naudojami dviejų baltymų, NS3 ir NS4 fragmentai, pažymėti kaip 5-1-1 ir C100-3.

Tuo pačiu metu buvo parengti patvirtinamieji testai, pagrįsti imunoblotu su rekombinantiniais baltymais (RIBA). Šių pirmosios kartos bandymų sistemų jautrumas buvo tik 64% ELISA ir 55% imunoblotų. Antrosios kartos bandymo sistemos pasirodė rinkoje 1991 metais. Kaip antigenai, adsorbuojami kietoje fazėje, šiose bandymų sistemose buvo naudojami kappido baltymai (fragmentas C22-3) ir nesondruktūrinių regionų NS3 (fragmentai c200 ir s3S3) bei NS4 antigenai, kurie leido padidinti tyrimo jautrumą ir specifiškumą. Kadangi humoralinis imuninis atsakas į kapiliarų antigenus (struktūrinius baltymus) yra daugiau nenormalus, hemas yra sumažinamas iki nestruktūrinių baltymų, laikotarpis nuo infekcijos iki aptinkamos serokonversijos buvo sumažintas iki dviejų mėnesių.

Patvirtinančios imunoblotinės bandymų sistemos leido identifikuoti antigenus, dalyvaujančius reakcijoje. Rezultatai, gauti naudojant šias bandymo sistemas, buvo traktuojami kaip teigiami tik tada, kai tiriamuose substratuose esantys antikūnai reagavo bent su dviem antigenais, tuo tarpu, kai buvo reakcija su tik vienu iš antigenų, rezultatas buvo laikomas neaiškiu. Buvo nustatyta, kad antrosios kartos bandymų sistemų specifiškumas priklausė nuo antigenų šaltinio. 1993 m. Rinkoje pasirodė trečios kartos bandymų sistemos. Be minėtų antigenų, šiose bandymų sistemose taip pat naudojami antigenai, kurių aminorūgščių seka atitinka NS5 baltymų imunodominantinius regionus.

Pirmosios, antros ir trečios kartos bandymo sistemose kaip antigenai buvo panaudoti rekombinantiniai arba sintetiniai peptidai. Šiuo metu taip pat galima išskirti ketvirtos kartos bandymų sistemas, kuriose rekombinantinių ir sintetinių peptidų deriniai naudojami kaip imunosorbentas.

Patirtis naudojant įvairių kartų testavimo sistemas pasaulyje yra labai didelė. Nustatyta, kad jei naudojant pirmosios ar antrosios kartos bandymo sistemas pacientams, sergantiems ūminiu virusiniu hepatitu C, antikūnai buvo nustatyti 10-16 ir tam tikrais atvejais 25-30 savaičių nuo ligos pradžios, tada trečiosios kartos diagnostika leido šį laikotarpį sumažinti 2-3 savaites. Remiantis apibendrintais duomenimis, pirmosios, antros ir trečios kartos bandymų sistemų jautris yra atitinkamai 70-80%, 92-95% ir 97%.

Tuo pačiu metu, 2001 m. S. Colin duomenimis, trečios kartos bandymų sistemų jautrumas buvo 98,9% pacientams, sergantiems lėtinėmis kepenų ligomis, ir 97,2% specialiose serumo kontrolinėse plokštelėse. Trečiosios ir ketvirtos kartos imunogeniškų bandymų sistemų didelio jautrumo pasiekimas yra susijęs su kai kuriomis problemomis užtikrinant tyrimo specifiškumą, kuris kai kuriais atvejais gali sukelti klaidingai teigiamų rezultatų. Literatūroje yra įrodymų apie galimas ELISA 3 bandymų sistemų specifiškumo klaidas. Jie yra bendri visoms ELISA testo sistemoms, įskaitant bandymo sistemas diagnozuoti AIDS.

Klaidų teigiamus rezultatus gali lemti padidėjęs gama gliukozino kiekis mėginių (afrikinės rasės, mielomos, reumatoidinių veiksnių pacientai), kepenų liga (cirozė, vėžys), autoimuninės ligos (kolagenozė, autoimuninis hepatitas), kitos virusinės infekcijos (ŽIV, hepatitas B ) ir ilgalaikis serumų saugojimas besikeičiančiomis temperatūros sąlygomis. Bet kokia imunizacija gali būti susijusi su klaidingai teigiamų reakcijų dažnumu. Šiuo metu rekomenduojamos šios problemos pašalinimo priemonės yra šios: a) mėginio pakartotinis nustatymas tame pačiame EFTS; b) kartotinis anti-HCV nustatymas kituose IFTS; c) ELISA ir imunobloto pagrindu patvirtinamų testų naudojimas.

Tačiau, kaip rodo tyrimai, kuriuos atliko Rusijos ir užsienio tyrėjai, siūlomų metodų naudojimas rezultatų patvirtinimui dažnai lemia jų galutinio aiškinimo neatitikimus.

Šiuo metu anti-HCV nustatymo IPT gamintojai gauna didelį jautrumą arba išsamiau nustato antikūnus prieš NS3 arba antikūnus prieš antigenų šerdį. Lyginamieji tyrimai, atlikti su įvairiomis rizikos grupėmis ir specialiais valdymo pultais, parodė, kad bandymų sistemos, kurios geriau aptiko antikūnus prieš NS3, pasirodė esančios šiek tiek jautresnės nei bandymų sistemos, kurios geriau aptiko antikūnus prieš pagrindinius antigenus. Jų jautrumas buvo atitinkamai 99,9% ir 98,6%.

Iš viso hepatito C antikūnų analizės žymenys ir analizė

Virusiniai kepenų pažeidimai šiandien dažnai pasireiškia gastroenterologų praktikoje. Be to, lyderis tarp jų yra hepatitas C. Kalbant apie lėtinę stadiją, jis smarkiai pakenks kepenų ląsteles, sulaužys jo virškinimo ir barjerines funkcijas.

Hepatitas C būdingas vangus srovės, ilgą laikotarpį be pagrindinių ligos simptomų pasireiškimo ir didelės komplikacijų rizikos. Liga ilgą laiką nepasiduoda ir gali būti atskleista tik su hepatito C antikūnų ir kitų žymenų tyrimu.

Virusas veikia kepenų ląsteles (kepenų ląsteles), sukelia jų disfunkciją ir sunaikinimą. Palaipsniui, praeinant lūžių stadijoje, liga sukelia žmogaus mirtį. Sėkminga paciento hepatito C antikūnų diagnozė gali sustabdyti ligos vystymąsi, pagerinti paciento kokybę ir gyvenimo trukmę.

Hepatito C virusas pirmą kartą buvo izoliuotas XX amžiaus pabaigoje. Šiandien medicina skiria šešis viruso variantus ir daugiau nei šimtą jo potipių. Labai svarbus mikrobų ir jo potipio tipų nustatymas žmonėms, nes jie lemia ligos eigą ir todėl padeda jį gydyti.

Nuo to momento, kai virusas pirmą kartą patenka į žmogaus kraują, praeina nuo 2 iki 20 savaičių, kol pasirodo pirmieji simptomai. Daugiau nei keturi penktadaliai visų atvejų, ūminė infekcija vystosi be jokių simptomų. Ir tik viename iš penkių atvejų gali būti vystomas ūmus procesas, turintis būdingą ryškią klinikinę įvaizdį pagal visas geltos perkėlimo taisykles. Lėtinė infekcija įgyja daugiau nei pusę pacientų, o tada pereina į kepenų cirozę.

Antikūnai, nustatyti laiku nuo hepatito C viruso, gali nustatyti infekciją labiausiai pirminėje stadijoje ir suteikti pacientui galimybę visiškai išgydyti.

Kas yra hepatito C antikūnų?

Žmonės, kurie nėra susiję su vaistiniais preparatais, gali turėti natūralų klausimą - hepatito C antikūnų, kas tai yra?

Šios ligos virusas jo struktūroje turi daug baltymų komponentų. Nurijus šiuos baltymus, imuninė sistema reaguoja ir jiems susidaro hepatito C antikūnai. Atskirų rūšių antikūnai yra išskiriami priklausomai nuo pirminio baltymo tipo. Jie nustatomi laboratorija skirtingais laiko periodais ir diagnozuojami įvairūs ligos etapai.

Kaip atliekamas anti-hepatito C antikūnų tyrimas?

Norint nustatyti hepatito C antikūnus, laboratorijoje imamas žmogus vartoti veninį kraują. Šis tyrimas yra patogu, nes jame nereikalingas išankstinis paruošimas, išskyrus susilaikymą nuo valgymo 8 valandas iki procedūros. Steriliu mėgintuvėliu laikomas subjekto kraujas, nustatomas atitinkamas imunoglobulinas po fermentais susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) metodo, pagrįsto antigenų ir antikūnų ryšiu.

Diagnozės indikacijos:

  • kepenų sutrikimas, pacientų skundai;
  • kepenų funkcijos rodiklių padidėjimas biocheminiuose tyrimuose - transaminazės ir bilirubino frakcijos;
  • priešoperacinis tyrimas;
  • nėštumo planavimas;
  • abejotini ultragarsiniai duomenys, pilvo ertmės organų, ypač kepenų, diagnozė.

Tačiau dažnai hepatito C antikūnai randami kraujyje gana atsitiktinai, tiriant nėščią moterį ar planuojamą operaciją. Žmonėms ši informacija daugeliu atvejų yra šokas. Bet nepanikuokite.

Yra keletas atvejų, kai gali būti tiek klaidingai neigiamų, tiek klaidingai teigiamų diagnozavimo rezultatų. Todėl, pasikonsultavusi su specialistu, rekomenduojama pakartoti abejotiną analizę.

Jei nustatomi antikūnai prieš hepatito C, tai nėra verta prisitaikyti prie blogiausio. Būtina kreiptis į specialistą ir atlikti papildomus egzaminus.

Antikūnų prieš hepatitui C tipai

Priklausomai nuo antigeno, su kuriuo jie susidaro, hepatito C antikūniai yra suskirstyti į grupes.

Anti-HCV IgG - G klasės antikūnai prieš hepatito C virusą

Tai yra pagrindinė antikūnų rūšis, diagnozuojama infekcijai pirminėje pacientų atrankoje. "Šie hepatito C žymekliai, kas tai yra?" Bet kuris pacientas paprašys gydytojo.

Jei šie antikūnai prieš hepatitui C yra teigiami, tai reiškia, kad imuninė sistema anksčiau susidūrė su šiuo virusu, o vėlyvoji ligos forma gali būti be ryškios klinikinės nuotraukos. Atrankos metu nėra aktyvios viruso replikacijos.

Imunoglobulinų duomenų nustatymas žmogaus kraujyje yra papildomas tyrimas (hepatito C patogeneko RNR nustatymas).

Anti-HCV core IgM - M klasės antikūnai prieš HCV branduolinius baltymus

Tokio tipo žymekliai pradeda išsiskirti iš karto po to, kai patogenai pateko į žmogaus kūną. Laboratorija gali atsekti vieną mėnesį po infekcijos. Jei nustatomi M klasės hepatito C antikūnai, diagnozuojama ūminė fazė. Šių antikūnų kiekis padidėja tuo metu, kai silpnėja imuninė sistema ir aktyvuoja virusą lėtiniu ligos procesu.

Su ligos sukėlėjo aktyvumo sumažėjimu ir ligos pertraukimu į lėtinę formą tyrimo metu tokio tipo antikūnai gali nebūti diagnozuoti kraujyje.

Anti-HCV kiekis - bendras hepatito C antikūnas (IgG ir IgM)

Praktinėse situacijose tai dažnai vadinama tokio pobūdžio tyrimais. Visų antikūnų prieš hepatito C virusą yra abiejų kategorijų žymenų aptikimas tiek M, tiek G. Ši analizė tampa informatyvi po pirmosios antikūnų klasės sukaupimo, ty 3-6 savaičių po infekcijos fakto. Po dviejų mėnesių vidutiniškai po šios datos aktyviai gaminami G klasės imunoglobulinai. Jie nustatomi sergančio žmogaus kraujyje visą jo gyvenimą arba iki viruso pašalinimo.

Iš viso hepatito C antikūnų yra universalus pirminio ligos patikros metodas praėjus mėnesiui po žmogaus infekcijos.

Anti HCV NS - antikūnai prieš nekonstrukcinius HCV baltymus

Pirmiau minėti žymenys priklausė hepatito C patogeneko struktūriniams baltyminiams junginiams. Tačiau yra klasė baltymų, vadinamų ne struktūriškai. Taip pat galima diagnozuoti ligos ligą. Tai yra NS3, NS4, NS5 grupės.

Antikūnai prie NS3 elementų yra aptiktos pačioje pirmojoje stadijoje. Jie apibūdina pirminę sąveiką su patogene ir tarnauja kaip nepriklausomas infekcijos buvimo indikatorius. Ilgalaikis šių titrų išlaikymas dideliu kiekiu gali būti padidėjusios infekcijos pavojaus rodiklis, kuris tampa lėtinis.

Vėlesniais ligos laikotarpiais yra antikūnų prieš NS4 ir NS5 elementus. Pirmasis iš jų rodo kepenų pažeidimo lygį, antrasis - dėl lėtinių infekcijų mechanizmų paleidimo. Abiejų rodiklių titrų sumažėjimas bus teigiamas ženklas, rodantis, kad atleidimas pradedamas.

Praktikoje nestruktūrinių hepatito C antikūnų buvimas kraujyje retai tikrinamas, nes tai žymiai padidina tyrimo išlaidas. Dažniau kepenų būklės tyrimui naudojami pagrindiniai hepatito C antikūnai.

Kiti hepatito C žymenys

Medicinos praktikoje yra keletas kitų rodiklių, leidžiančių įvertinti paciento hepatito C viruso buvimą.

HCV-RNR - hepatito C viruso RNR

Hepatito C - RNR sukeltasis veiksnys, kurio sudėtyje yra PGR metodas ir atvirkštinė transkripcija, leidžianti nustatyti patogeno geną kraujyje ar biomedžiagoje, paimtą iš kepenų biopsijos.

Šios bandymų sistemos yra labai jautrios ir gali aptikti net vieną viruso dalelę medžiagoje.

Tokiu būdu galima ne tik diagnozuoti ligą, bet ir nustatyti jo rūšį, kuri padeda kurti būsimo gydymo planą.

Hepatito C antikūnai: dekodavimo analizė

Jei pacientas gauna ELISA testą hepatito C nustatymo tyrimui, jis gali stebėti, kas yra hepatito C antikūnai? O ką jie rodo?

Kalbant apie hepatito C biomedžiagą, bendri antikūnai paprastai nenustatomi.

Apsvarstykite ELISA testus hepatito C ir jų interpretavimo pavyzdžius:

"Hepatito C virusas: viruso antigenai ir mikroorganizmo imuninės sistemos atsakas jiems Informacinis-metodinis vadovas Novosibirskas UDC 616.36-002.14: 578.891] -078.33 Hepatito C virusas :. "

Virusas HEPATITIS C:

viruso antigenai ir reakcija

apie juos imuninę sistemą

Hepatito C virusas: viruso antigenai ir mikroorganizmo imuninės sistemos atsakas:

informacinis ir metodinis vadovas / L.I. Nikolajevas.

- Novosibirskas: "Vector-Best", 2009. 78 p.

Šioje instrukcijoje pateikiamas dabartinis supratimas apie hepatito C viruso (HCV) molekulinę biologiją, jo antigenus ir makroorganizmo imuninę apsaugą, kai yra užkrėstas šiuo virusu. Nagrinėjami specifinio humorinio imuniteto skirtumai žmonėms, sergantiems ūminiu ir lėtiniu hepatitu C, antivirusinių imunoglobulinų kiekio pasikeitimo modeliais natūraliai ūminėse ir lėtinėse infekcijose, taip pat specifinio humoralinio imuniteto ypatumai vaikams, sergantiems HCV infekcija.

Vadovas skirtas biologinių ir medicinos tyrimų institutų darbuotojams, medicinos ir diagnostikos centrų darbuotojams bei gydytojų doktorantų studijoms.

L.I. Nikolajeva - mokslų biologijos mokslų daktaras, pagrindinis mokslinis tyrimo institutas virusologijos. D.I. Ivanovo RAMS.

Paskelbta autoriaus leidime.

© Nikolajevas, L.I., 2009 © UAB "Vector-Best", 2009

SANTRUMPOS SĄRAŠAS

aco - aminorūgšties likučiai ALAT - alanino aminotransferazės AIC - antigeną pateikiančios ląstelės ASAT - aspartato aminotransferazė kDa - kilodaltono LDL - mažo tankio lipoproteinų VLDL - labai mažo tankio lipoproteinų MCA - monokloniniai antikūnai MHC - pagrindinis histologinio suderinamumo kompleksas NTO - neintervertintas regionas OGS - stotelė Pirmasis hepatito C AT-PGR - atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija ŽPV - psevdovirusnye dalelių PGR - polimerazės grandininė reakcija CHC - lėtiniu hepatitu C TCL - T helperių limfocitai NBN - citotoksiniai T limfocitai EPR - endoplazminiame retirulum

TURINYS

1 skyrius. HEPATITO C VIRUSAS

1.1. Viruso genomo organizavimas

1.2. Viriono struktūra

2 skyrius. PIRMINIAI VIRUSO HEPATITIO ANTIGENAI C.

2.1. Korpuso glikoproteinų struktūra, funkcija ir epitopai

2.2. Nukleokapsidinis antigenas

2.3. NS2 baltymo charakteristikos

2.4. NS3 baltymo struktūra, funkcija ir epitopai.

2.5. NS4a ir NS4b polipeptidai ir jų veiksniai. 35

2.6. Biologinė reikšmė ir baltymų NS5a ir NS5b epitopai

3 skyrius. IMMUNO SISTEMOS VAIDMUO RIBOTI HCV INFEKCIJĄ

3.1. Pagrindiniai imuninės sistemos veiksniai, turintys įtakos viruso eliminacijai ūminėje infekcijos fazėje. _

3.2. T-ląstelių atsako įtaka hepatitui C

3.3. Humorinis atsakas į hepatito C antigenus 49 3.3.1. Konkretūs antikūniai esant ūminei infekcijos fazei. _ 3.3.2. Specifinis humoralinis imunitetas esant lėtiniam hepatitui C. 55.3.3. HCV specifinis humoralinis imunitetas žmonėms, kuriems buvo būdingas ūminis uždegimas

3.3.4. Specifinis humoralinis imunitetas vaikams, sergantiems HCV infekcija

ĮVADAS

Šiuo metu Rusijos Federacijoje, kaip ir daugumoje šalių, yra nepalanki epidemiologinė padėtis dėl parenterinio virusinio hepatito [1-3]. Tikimasi, kad iki 2015-2020 m užsikrėtusių žmonių skaičius visame pasaulyje bus dvigubai [2, 3]. Nuo 2001 m. Mūsų šalyje buvo tendencija mažinti ūminio hepatito C (GHS) paplitimą [1, 4]. Po 2004 m. Lėtiniu hepatitu C (CHC) sergančių žmonių nustatymas sumažėjo [5, 6].

Tačiau tarp vaikų iki 2006 m. Padidėjo pacientų, sergančių lėtiniu hepatitu C, skaičius [1, 5, 6]. Pasak ekspertų, 1,4-2,4% Rusijos Federacijos piliečių yra užsikrėtę hepatito C virusu (HCV), o dauguma šių žmonių jau yra lėtinė infekcijos forma [7, 8]. CHC pasižymi progresuojančiu kursu, dėl kurio atsiranda kepenų cirozė (iki 30%), pirminė analizuojama vėžiu (iki 15%) ir ekstrahepatikos pasireiškimai (iki 74%) [9, 10].

Nepaisant intensyvaus HCV infekcijos tyrimo, dar nebuvo įmanoma nustatyti nuolatinės lėtinės infekcijos formos atsiradimo priežastys, nustatyti imuninio atsako požymius, dėl kurių virusas buvo natūraliai pašalintas ūminėje infekcijos fazėje, taip pat sukurti profilaktinę vakciną. Yra žinoma, kad HCV antigenai gali sukelti B ir T ląstelių atsaką, kurio 15-25% pacientų, sergančių ūmine hepatitu C, pakanka virusui pašalinti [2, 11]. Tačiau dažniausiai ūminė infekcijos fazė tampa lėtinė dėl labiau ar mažiau išreikšto prisitaikančio imuninio atsako [12, 13].

Hepatito C virusas yra unikalus patogenas, galintis išvengti imuninės sistemos kontrolės, kurti naujus genetinius ir antigeninius variantus, uždelsti T-padėjėjo ir T-killer reakcijos formavimą ūminiu hepatitu C ir sukelti pakartotinę infekciją regeneruotuose žmonėse. Intensyvus HCV infekcijos tyrimas prasidėjo po jo ligos sukėlėjo identifikavimo 1989 metais ir pirmiausia siekė pagrindinio tikslo - sukurti prevencinę vakciną [14, 15]. Iki dešimtojo dešimtmečio pabaigos po nesėkmingų bandymų kurti tokią vakciną, pagrįstą rekombinantinėmis HCV apvalkalo baltymo medžiagomis, priešvirusinio imuniteto tyrimo metu dėmesys buvo skiriamas specifiniam T ląstelių atsakui.

Reikia pažymėti, kad hepatito C apsauginių imuninių mechanizmų tyrimą daugiausia apsunkina tai, kad trūksta turimo laboratorinio infekcijos modelio, virusas veikia tik žmonėms ir šimpanzėms. Tačiau, kaip parodė A. Basset ir jo bendraautoriai, virusu užsikrėtusiems šimpanzėms yra silpniausia infekcijos forma, o atsigavimas vyksta dažniau nei žmonės [16].

Šiame vadove apibendrinami dabartiniai duomenys apie HCV antigenus ir aptariamos žmogaus kūno imuninės sistemos apsaugos galimybės šios infekcijos metu. Ypatingas dėmesys skiriamas konkrečiam humoraliniam atsakymui, nes jis buvo tas, kuris nukrito nuo intensyvios studijos. Kaip pastebi užsienio tyrėjai, daugiausia dėl to, kad nėra atskirų (atskirų) HCV antigenų antikūnų analizės metodų [17]. Nuo 1998 metų mūsų šalyje gaminamos imuninės fermentacijos bandymo sistemos, skirtos atskirų HCV antigenų imunoglobulinų analizei. Tai leido vietos specialistams gauti vertingos informacijos apie humoralinį atsaką į virusinius baltymus.

6 skyrius 1. HEPATITO C VIRUSAS

1.1. Viruso genomo organizavimas 1989-1990 m., Atsiradus molekulinių genetinių metodų kūrimui, tapo įmanoma HCV genomo klonavimo ir izoliacijos, o vėliau pats virusas, kurio egzistavimas anksčiau buvo numatytas [14, 15, 18, 19]. HCV genomo organizavimo ypatybės leido ją įtraukti į "Flaviviridae" šeimą naujos genties hepaciviruso, kuris vėliau įtraukė ir kitus virusus [15, 20, 21]. HCV genomą atstovauja viengubas RNR, turintis teigiamą poliškumą ir kuriame yra apie 9400-9600 nukleotidų likučių. Jis pasižymi unikalia atvira skaitymo rėmeliu, trumpais 5- ir 3-ių galų neperduodamais regionais (UTR) ir vietovėmis, turinčiomis didelį mutacijų greitį [21, 22].

Atvirojo skaitymo rėmas koduoja vieną baltymo pirmtaką, vadinamą poliproteinu, kurį sudaro 3008-3037 aminorūgščių liekanos (aco) [23]. Dėl bendrojo ir post-transliacinio proteolitinio poliproteino skilimo ir produktų perdirbimo susidaro struktūriniai ir nestruktūriniai baltymai. Virusinių antigenų išdėstymas poliproteinoje, proteazių veikimo vietos ir skirtingų viruso izoliatų homologijos laipsnis pateikti pav. 1 [24].

Dėl genetinės HCV įvairovės dešimtojo dešimtmečio pradžioje buvo sunku klasifikuoti jo izoliatus. 1994 m. II tarptautinėje konferencijoje "Hepatitas C ir susijusi viruso" buvo susitarta nustatyti viruso klasifikaciją genų, koduojančių NS5b baltymą [25]. Dėl to izoliuoti 6 genotipai ir apie 80 HCV potipių.

(5-NTO) * (3-NTO) 92% 81% 55% 65% 57% 70% 65% 66% 70% 26% Pav. 1. Viruso antigenų buvimo vietos poliproteinoje schema [24]. Ląstelių proteazių veikimo vietos nurodomos aukščiau esančiomis strėlėmis serumo HCV proteazei - žemiau. Regionas, suskaidytas NS2 / NS3 viruso proteaze, pažymėtas žvaigždute.

Toliau pateikiamas viruso izoliatų homologijos procentas, atsižvelgiant į NTO.

Pagrindiniai genotipai yra homologiniai 65-70%, potipiai (potipiai) yra 77-80%, o genetiniai variantai viename izoliato 95-97%. Vėliau 2005 m. Ekspertų grupė patikslino HCV klasifikaciją [26]. Rekomenduojama laikyti terminą "genotipas" vietoj "Clyde", kurį siūlo kai kurie mokslininkai. Įveskite viruso izoliatus, turėtų būti analizuojamas širdies / E1, NS5b genomo regionas ir turėtų būti nustatyta visos virusinės RNR nukleotidų seka, jei įtariama rekombinacija [27]. Siūloma klasifikuoti visus HCV izoliatus, kurie iki šiol žinomi į šešis genotipus, ir apsvarstyti genetopus 7-10, kuriuos kai kurie tyrinėtojai pateikė kaip potipius.

Labiausiai saugoma HCV RNR yra 5-galinė NTO - apie 92% homologijos [22]. Dėl šios konservatyvios srities tapo įmanoma aptikti virusinę RNR skirtinguose izoliatuose RT-PCR metodu (atvirkštinės transkripcijos polimerazės grandininė reakcija) [28, 29]. Užkrėstuose organizmuose HCV egzistuoja kaip genetiškai heterogeninių, bet glaudžiai susijusių variantų, vadinamų kvazisifencijomis, rinkiniai, kurių nukleotidų seka skiriasi iki kelių procentų [30].

Infekcinio proceso metu virusas yra veikiamas imuninio slėgio: kai kurie HCV variantai pašalinami imuninės sistemos šeimininku, o kiti kyla [31, 32]. Nauji viruso variantai atsiranda dėl to, kad nėra HCV RNR-polimerazės RNR-polimerazės, pakoreguojant 3-5-eksonukleazės aktyvumą [33]. Todėl klaidos, atsirandančios virusinės RNR replikacijos metu, nėra pašalintos.

Dauguma HCV RNR nukleotidų sekos pokyčių yra vadinamose sinonimų vietose, kurių mutacijos neturi įtakos biologiškai svarbioms viruso savybėms. Sinonimų svetainių palyginimas leidžia nustatyti skirtingų viruso variantų skirtumus. Taigi, įvairiose teritorijose izoliuotų HCV izoliatų tyrime nustatyta, kad viruso įsiskverbimas į žmonių populiaciją tikriausiai įvyko prieš tūkstantį metų [34, 35].

Pirmas HCV genomo elementas, 5-galinis UTR, susideda iš 341 nukleotidų liekanų ir atlieka svarbias biologines funkcijas. Šis regionas užtikrina virusinės RNR sąveiką su ribosomų 40S subvienetu, sudarant sudėtinę susirišimo vietos struktūrą, nurodytą anglų santrumpa IRES (vidinė ribosomų įvesties vieta) [36]. IRES HCV sudėtinga erdvinė struktūra (2 pav.) [37, 38].

- 480 60 - 140 - 440 - 5 - 500

Pav. 2. IRES antrinės struktūros su keturiomis pagrindinėmis sritimis (I-IV) schema, pseudomodelis, pagrindiniai (1) ir papildomi (2) kodonai pateikiami nedideliomis iš straipsnio D.M. Forton ir kt. [38].

Prijungus HCV IRES į ribosomos 40S subvienetą, aktyvaus transliacinio komplekso formavimas ir viruso genomo vertimas prasideda per nepriklausomą nuo dangtelio mechanizmą [37, 39]. Norint inicijuoti vertimą, naudojamas AUG kodonas 342 padėtyje (2 pav.). Nustatyta, kad viruso RNR sąveika su ribosomos 40S subviene pastarojoje sukelia sudėtingus konformacinius pokyčius, kurie yra unikalus procesas [40].

HCV genomo vertimui įprasti (kanoniniai) ląstelių iniciacijos faktoriai eIF2 ir eIF3 yra būtini. Kadangi aktyvus komplekso susidaro transliacinį lėtai, pradinis vertimo greitis yra mažas, tačiau jis padidina plius vijos RNR nekanoninių ląstelių aktyvatoriaus baltymų, pavyzdžiui, antigeno La, heterogeninio branduolinės ribonucleoprotein L, ir ribosomų baltymas rpS5 keliose nenustatyta ląstelių baltymų sąveiką [41-44 ]

HCV IRES prisijungimo prie ribosomos sugebėjimas slopinti kai kuriuos ląstelių baltymus, peptidus ir vitaminą B12 [45-49].

Trumpos RNR, papildančios IRES, vadinamos trumpomis trukdančiomis RNR, susieja su juo ir sustabdo viruso genomo vertimą [50]. Parodyta, kad alfa, beta ir gama interferonų antivirusinis poveikis taip pat atsiranda IRES medijuoto vertimo lygyje [51]. Nustatyta, kad HCV struktūros IRES struktūros skiriasi nuo audinių [38, 52, 53]. Gali būti, kad tai yra vienas iš būdų užtikrinti viruso išlikimą daugelio audinių ląstelėse.

HCV genomo replikacijos procese RNR susidaro su neigiamu poliškumu, vadinamu neigiama RNR grandine. Jis nestabilus ir suskaidomas ląstelių fermentais (beveik 60% per 30 minučių) [54]. Užkrėstoje ląstelėje pliuso ir minuso RNR grandinių santykis yra 10: 1 [55]. Siekiant efektyviai replikuoti viruso genomą, būtinas ląstelinis baltymas PTB (polipiramidino traktą rišantis baltymas), kuris rišasi su polipiramidino RNR trakte [56]. Modelių eksperimentuose nustatyta, kad per vieną užkrėstą ląstelę per dieną susidaro apie 1000 kopijų RNR pliuso grandinių ir maždaug 100 kopijų neigiamų RNR grandinių [57].

Galutinis elementas genomo - 3-terminalas NTO - dalyvauja replikacijos pradžios (inicijavimo vietoje esančio minustsepi RNR), ir vertimo reguliavimo stabilizuojant genomo RNR [41, 59-61]. Trijų galinių UTR struktūroje yra trys elementai:

1) trumpa sekcija su kintama seka, susidedančia iš 40 nukleotidų liekanų, 2) poliuridino traktas, turintis 36 ar daugiau uridino likučių, 3) unikali konservatyvi X sritis, susidedanti iš 98 nukleotidų [60]. Regionas X turi sudėtingą antrinę struktūrą, kurioje išsiskiria viena ilga ir dvi trumpos juostos [61]. Nustatyta, kad šis regionas tiesiogiai dalyvauja formuojant kopijavimo kompleksą, vertimo inicijavimo ir replikacijos reguliavimą [41, 62, 63].

1.2. Iš viriono In pradžioje eksperimentų su HCV filtruojant filtrų su skirtingais akučių skersmuo struktūra buvo parodyta, kad viriono dydis nuo 30 iki 60 nm, kuris sutampa su elektronų mikroskopijos analizę biologinių mėginių [64, 65] viruso duomenų. 1990 metų pradžioje iš žmonių, turinčių hepatito C serume buvo izoliuoti RNR, kurių sudėtyje yra daleles, kurios, kai gradientas ultracentrifugavimą koncentruotų penkiose srityse į tankio 0,95-1,21 g / ml [66-68] intervale. Kiekviena iš šių zonų buvo užkrėsta šimpanzėmis [68]. Pasirodo, kad zona, kurios tankis yra 0,95-1,10 g / ml, turėjo didžiausią užkrečiamumą. Šis neįprastai mažas viruso dalelių tankis paaiškinamas HCV ir mažo tankio lipoproteinų (MTL) ir labai mažo tankio (VLDL) serumo ryšiu [19, 66].

Lipoproteinai yra sferinės dalelės, susidedančios iš fosfolipidų monolitų su cholesterolio įtraukimais ir apolipoproteinais B ir E, o dalelių vidinė ertmė pilna trigliceridų [69]. Pagrindinė lipoproteinų funkcija yra trigliceridų ir cholesterolio patekimas į įvairias ląsteles. Lipoproteinų sintezė atsiranda hepatocitų endoplazminio išstojimo metu (EPR), kur jie, greičiausiai, sąveikauja su HCV baltymų-lipidų apvalkalu, sudaro kompleksą [70]. HCV ląstelių, atsakingų už viruso komplekso su LDL / VLDL susidarymą, vietos dar nėra nustatytos. Šis kompleksas vadinamas lipoviruso dalelėmis. Komplekso virionai yra apsaugoti nuo virusų neutralizuojančių antikūnų ir gali įsiskverbti į hepatocitus, naudojant MTL receptorių [68]. Apie 75% kraujo krešėjimo kraujyje lipoproteinų grįžta į hepatocitus per specialų MTL receptorių; likusi dalis patenka į hepatocitus skirtingai. Nustatyta, kad apie 20% virionų nesiejami su serumo lipoproteinu [71].

HCV atsparumo organiniams tirpikliams tyrimas, A. M. Princas ir jo kolegos parodė, kad virusas turi lipidų baltymų membraną, kurią sudaro viruso lipido ir viruso paviršiaus baltymai [72]. Vėlesniais metais HCV struktūra buvo ištobulinta, naudojant pacientų, sergančių hepatitu C ir dirbtinėmis viruso dalimis (HPV), kepenų biopsijos didelės raiškos elektronine-mikroskopine analize. ŽPV formuojasi po HCV genomo fragmento (vadinamo replikono) išraiškos įvairiuose vektoriuose. Vektoriais buvo naudojami vezikuliniai stomatito virusai, vakcinos virusai ir bakulovirusas [73-75]. Kai įtrauktas į retroviruso genomo (ŽIV arba leukemijos virusu pelių) nukleotidų seka, koduojanti voko baltymus HCV, gebančius gauti psevdovirusnye dalelių viruso (HPV), apvalkale į kurią buvo įtrauktas E1 ir E2 baltymus HCV, ir visi kiti elementai dalelių yra retroviruso [76, 77 ] ŽPV naudojimas palengvino HCV morfologijos ir surinkimo tyrimą bei jo baltymų savybių tyrimą. Konkrečiai buvo nustatyti virjono matmenys, kurių skersmuo buvo 50 nm, kuris atitinka šiuolaikinius duomenis, gautus iš natūralaus viruso, izoliuoto nuo pacientų, sergančių hepatitu C, tyrime [78, 79].

Pav. 3 pavaizduota HPV elektroninė mikrofotografija, gauta naudojant perdavimo elektroninį mikroskopą [79].

Pav. 3. Elektroninė mikrografija su neigiamu ŽPV kontrastu [79].

Dešinėje kairėje, su didesniu didinimu, parodytas vienas virionas su T formos išsikišusiu paviršiaus baltymu.

Pagal HCV voką yra nukleokapsido, kuris susidaro iš šerdies (šerdies) baltymo ir kuriame yra virusinės RNR (4 pav.). Nuklecokapsido dydis, nustatytas elektroninėmis mikroskopinėmis neuždarių virusinių dalelių analizėmis, yra 33-40 nm [74].

Iki šiol nebuvo įmanoma izoliuoti HCV tokio dydžio, kuris būtų pakankamas išsamiam tyrimui nei sergantiems žmonėms, nei šimpanzėms. Tai yra dėl to, kad virusas yra mažas, jo heterogeniškumas, taip pat gebėjimas sudaryti kompleksus su antikūnų ir kraujo lipoproteinų. Pirmąją ataskaitą apie HCV auginimą transplantuojamose ląstelių kultūrose pateikė P.G. Deryabinas ir jo bendraautoriai 1997 m. [81]. 2005 m. Keturios tyrėjų grupės paskelbė eksperimentinius duomenis apie viruso išraišką transplantuojamos ląstelių kultūrose, gamindamos infekcines virusines daleles [82-85].

HCV morfogenezė atliekama endoplazminio išėjimo į pensiją membranose, Golgi aparatų vakuolėse ir ląstelės citoplazmoje. Konstrukciniai viruso baltymai yra suskaidomi iš poliproteino ląsteliniais fermentais (signalo peptidais ir peptidų peptidazėmis). Pagrindinis baltymas lieka ant EPR citoplazminio paviršiaus ir citoplazmos lipidinių vakuumose, o apvalkalo baltymai dalinai įsiskverbia į EPR vidinę ertmę.

Endoplazminiu retikuliu E1 ir E2 baltymai sudaro kompleksą ir apdorojami, galbūt baigiasi "Golgi" sekretoriaus vakuumose. Nukleokapsidas po RNR pakavimo yra padengtas kriaukle, o virusas yra ekstruduotas į ESR cisternas. Remiantis kepenų biopsijos analizės rezultatais pacientams, sergantiems CHCV, V. Falcon ir kiti autoriai teigė, kad galutinis viruso morfogenezės etapas atsiranda EPR-tipo vezikulinėse citoplazmos struktūrose [86]. Formuotos virusinės dalelės palieka ląstelę kaip sekretorinių vakuuminių dalių dalis [87].

Vironų susidarymo dažnis pacientams, sergantiems lėtiniu HCV infekcija, gali siekti 1012 daleles per dieną, o virionų pusinės eliminacijos laikas kraujyje yra maždaug 3 valandos [88].

Skyriuje 2. hepatito C viruso antigeno Mokomosios apvalkalo baltymai yra HCV E1 ir E2 baltymai, nukleokapsidės ir nestruktūrinius baltymus NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B.

Be jų, nedideli polipeptidai taip pat perduodami iš viruso genomo: p7 peptido, F baltymo ir blogai ištirto polipeptido, kurio molekulinė masė yra apie 8 kDa [89].

Paskutiniai du nedideli baltymai sintezuojami, kai skaitoma genetinė informacija iš papildomų inicijuojančių kodonų, esančių genomo regione, kuris koduoja baltymą [22]. Nustatyta, kad mažai tirtas polipeptidas, kurio molekulinė masė yra apie 8 kDa, yra skaitomas iš 2 kodono (žr. 2 pav.). HCV baltymų išdėstymas EPR membranoje parodytas Fig. 5

P7 peptidas, dar vadinamas HCV viroporinu, sudaro heptemerius, kurie sudaro katijonui būdingą kanalą, kurio reikšmė viruso biologijoje dar nėra visiškai išaiškinta [91]. Daroma prielaida, kad jis dalyvauja ankstyvose viruso morfogenezės stadijose. Pastaruoju metu buvo įrodytas p7 peptido poveikis HCV infekcinėms savybėms [92].

Proteinas F sintezuojamas, nukreipiant genetinio kodo skaitymo rėmą vienu nukleotidų likučiu (naujas inicijuojantis kodonas prasideda nuo 341-os nukleotidų likučių, žr. 2 pav.) Ir turi

Ertmės EPR figūra. 5. HCV baltymų išdėstymas EPR membranoje pateikiamas su nedideliais B. Lindenbach ir C.M. Ryžiai [90].

konservatyvi aminorūgščių seka [93, 94]. Manoma, kad šis baltymas yra susijęs su nuolatine HCV infekcija [94, 95]. Galbūt yra tarp F baltymų ir kepenų steatoze lėtinio hepatito C išvaizdą nuoroda buvo parodyta, kad antikūnų prieš šio baltymo randami tik 10% pacientų, sergančių lėtiniu hepatitu C, bet jei jų vystymasis kepenų steatoze aptikimo norma šių antikūnų padidėjo tris kartus [96]. Šiuo metu vyksta intensyvus mažų HCV baltymų biologinių funkcijų tyrimas.

2.1. Struktūrą, funkciją ir apvalkalo baltymus epitopai Apvalkalo E1 baltymai (ako 192-383) ir E2 "(ako 384-746) yra fragmentai poliproteino yra sumontuotos meduliarinių (pagrindiniu) baltymo (pav. Žr. 1) [97, 98]. Pagal elektroforezės analizę, E1 baltymo molekulinė masė yra 31 kDa, E2 - 70 kDa. Abu baltymai priklauso transmembraniniams baltymams ir juose yra angliavandenių likučių [97]. Pagrindinės šių baltymų funkcijos

- sąveika su receptoriumi ir viruso genomo prasiskverbimas į ląstelės citoplazmą.

HCV baltymų biosintezė atliekama su ribozomis, susijusiomis su EPR. Dėl ypatingo translokacijos signalo didelė dalis poliproteino srities, atitinkančios E1 ir E2 baltymus, patenka į EPR talpos ertmę. Ten korinio signalo peptidazės suskaido šiuos baltymus vieni nuo kitų, taip pat iš pagrindinio baltymo [62, 97-99]. (Peptidazių veikimo vietos parodytos 1 pav.). Po to HCV apvalkalo baltymai lieka prisijungti prie EPR membranų dėl transmembraninių regionų, lokalizuotų jų polipeptidų grandinių COOH galūnėse [99, 100].

Sudėtingas E1 ir E2 baltymų sulenkimo ar sulankstymo procesas prasideda vienu metu su vertimu ir baigiamas po jo. Pagrindiniai E1 baltymo lankstymo etapai atliekami per 1 val. Naudojant ląstelinio baltymo chaperono kalneksiną, kuris su juo sudaro trumpalaikį kompleksą [101, 102]. Su dalyvaujančiu kalneksinu, keturi disulfido (S-S) ryšiai yra suformuoti iš aštuonių glikoproteino E1 cisteino liekanų. Per vieną valandą E1 glikoproteino erdvinė struktūra stabilizuoja [103].

E2 baltymo lankstymas yra ilgesnis (apie 4 valandas) nei E1 baltymo.

Akivaizdu, kad tai yra dėl 18-20 cisteino liekanų buvimo molekulėje, kuri gali sudaryti 9-10 disulfido jungtis ir intensyvų E2 baltymo glikozilinimą [104]. Erdvinis E2 baltymo pasiskirstymas vyksta dalyvaujant calnexinui ir dar nenustatytai chaperonams bei E1 baltymui [103, 104].

Daroma prielaida, kad jo pabaigoje 8-9 disulfido junginiai formuojasi vieno polipeptido ir vieno S-S jungties tarp dviejų E2-E2 polipeptidų jo E2 baltymo ribose.

E1-E2 kiaušinių baltymų kompleksas susidaro be kovalentinių ryšių [103-105]. Šio komplekso stechiometrija dar nėra nustatyta, tikriausiai dominuojantis komponentas yra E2 baltymas [104]. Baltymų lankstymas ir ląstelių glikoproteinų komplekso susidarymas ne visada būna teisingai, netinkamai surinkti E1 ir E2 baltymai, taip pat jų kompleksai yra randami EPR talpyklose didelės molekulinės užpildų formos [105].

Veikiant EPR tinklo ląstelių fermentams, E1 ir E2 baltymai yra glikoziluotos, sudarančios vadinamąjį chitobiozės šerdį [97].

Glikozilinimo procesas prasideda kartu su baltymų lankstymu ir baigiasi "Golgi" aparato vakuume. Glikozilinimas užtikrina tinkamą erdvinį sulankstymą, specifinės antigeninės struktūros susidarymą ir biologinio aktyvumo atsiradimą lukšto glikoproteiniuose. Be to, po glikozilinimo E1 ir E2 baltymai gali būti išskiriami iš ląstelių ir yra geriau apsaugoti nuo tam tikrų ląstelių proteolitinių fermentų.

Abi HCV glikoproteinai priklauso I tipo transmembraniniams baltymams, kurie būdingi NH2 galinio ektodomeno (baltymo, paveikto iš viruso apvalkalo lipidų dvigubo sluoksnio), ir COOH galinės transmembranos srities buvimo. E1 ir E2 baltymuose buvo nustatyta viena ar dvi transmembraninės grandinės, kurios dalyvauja formuojant E1-E2 kompleksą ir išlaiko glikoproteinus viruso apvalkalo lipidiniame dvigubame sluoksnyje [106-108].

Neseniai mokslininkai daug dėmesio skyrė sintezės peptidui (sujungtam peptidui), kuris apima endosomų lipidų dvisluoksnius sluoksnius ir virusą, HCV apvalkalo glikoproteinų paieškai. HCV atveju buvo pasiūlytas (kuris jau iš dalies patvirtintas) modelis skverbimosi į ląstelę pagal analogiją su erkinio encefalito viruso proceso charakteristika. Remiantis šiuo modeliu, HCV kontaktuojant su receptoriumi susidaro viruso receptorių kompleksas, kuris endokitozės vakuolių forma prasiskverbia į ląstelę (šį procesą taip pat vadina receptorių medijuotu endocitozu). Kituoju etapu endocitozinis vakuolas sujungiamas su endosomomis (citoplazminės vezikulinės ląstelės struktūra), kuriam būdingos žemos pH vertės. Esant rūgščiosios endosomos aplinkai, HCV paviršiniai glikoproteinai pasireiškia konformaciniais pokyčiais, dėl kurių susidaro ekspozicija ir sintezės peptidas įterpiamas į endosominę membraną. Šis procesas sukelia viruso ir endosomos membranos lipidų dvigubo sluoksnio sintezę, o tai baigiasi HCV RNR išsiskyrimu į ląstelės citoplazmą.

Iki šiol nebuvo nustatyta, kurioje iš dviejų HCV vokų glikoproteinų yra sulietas peptidas. Yra keletas prielaidų apie jo lokalizaciją E1 baltymo: vietoje su aminorūgščių liekanomis 265-287, 272-281 arba 275-293 [107, 109]. Kai kurių Flaviviridae šeimos narių (6 pav.) Panašių peptidų pagrindinės struktūros, kuriam būdingas HCV potipio 1a sintezės (Aco 265-287), pagrindinės struktūros buvo panašumai [109].

HCV glikoproteinui E1 buvo nustatytos keturios N-glikozilinimo vietos: tai yra aspiriniai likučiai 196, 209, 234 ir 305 [110-112] padėtyse. Naudojant taškų mutacijų metodą viruso RNR, koduojančio E1 baltymą, galima įrodyti, kad gliukozilinimo vietų išnykimas 209 ir 234 padėtyje nedaro įtakos E1-E2 komplekso susidarymui [110, 113]. Oligosacharidų likučiai

Pav. 6. Pagrindinė sintezės peptidų struktūra atskiruose Flaviviridae šeimos nariuose [109].

TBE - erkinio encefalito virusas, HLV - geltonosios karštinės virusas, WNE - japonų encefalito virusas, VDEN - dengies virusas, KUNV - Kunjan virusas, VNV - Vakarų Nilo virusas. Paprastai pažymėtos HCV (2 glicino ir 2 cisteino) aminorūgščių likučiai, pabrėžiami kursyvu pažymėti aminorūgščių likučiai, panašūs į jų fizikines ir chemines savybes.

pozicijose 196 ir 305 reikalingos tinkamai erdviniam E1 baltymo suliejimui, taip pat G1-E2 glikoproteinų komplekso formavimui. Be to, buvo įrodyta, kad angliavandenių likučiai E1 glikoproteino padėtyje 196 ir 209 yra būtini siekiant apsaugoti viruso užkrėtimą [112].

Pav. 7 parodytas hipotetinis E1 baltymo erdvinio lankstymo modelis, apskaičiuotas pagal proteominę analizę, kompiuterinį modeliavimą ir lyginamąją analizę su erkinio encefalito viruso apvalkalo proteinu E.

HCV glikoproteinų oligosacharidų grandines dažniausiai sudaro 6-9 manozės liekanos, pridedamos prie dviejų N-acetilglukozamino liekanų [114, 115]. Tik E2 baltymas turi sudėtingesnį oligosacharidų tipą, kuriame yra mažiau manozės liekanų, kurie iš dalies pakeičia fukozę, o N-acetilglukozamino liekanos yra galutinės oligosacharidų grandinės vietose [115].

Glikoproteino E2 metu buvo nustatyta 11 glikozilinimo vietų asparaginių likučių 417 (1), 423 (2), 430 (3), 448 (4), 476 (5), 532 (6), 540 (7), 556 (8 ), 576 (9), 623 (10) ir 645 (11) [111, 112, 115].

Parodyta, kad glikoproteinų E1 - E2 kompleksas nėra sudaromas, jei

Pav. 7. E1 baltymo apskaičiuotos erdvinės struktūros schemą pateikia lengva modifikacija iš R.F. Garry ir S. Dash [107].

Legenda: pakinktai - polipeptidų grandinė, cilindrai - alfa spiralė, strėlės - beta struktūra, tridentai - oligosacharidų grandinės, juodi segmentai - disulfido ryšys.

HCV E2 baltymo 10 padėtyje nėra oligosacharidų grandinės.

Virusas netenka infekciškumo, jei E2 glikoproteinas nėra angliavandenių likučių 1, 2, 4, 8, 10 ir 11 padėtyse [111]. Be to, nustatyta, kad oligosacharidų grandinės 1, 6 ir 11 padėtyse dalyvauja formuojant epitopus, kuriuose susidaro neutralizuojantys antikūnai [108, 116].

Nustatyta, kad 1a ir 3a potipio virusai skiriasi oligosacharidų grandinių skaičiumi vokų baltymuose [117]. Glikoproteino E2, priešingai nei E1 baltymui, yra 423 ir 430 [115, 116] pozicijose modifikuotų oligosacharidų liekanų.

Glikoproteinas E2 yra blogai pritaikomas fizikinių ir cheminių baltymų struktūros analizės metodų tyrimui, daugiausia dėl daugybės angliavandenių likučių. Dėl E2 glikoproteino oligosacharidų grandinių gausos sunku gauti baltymų kristalą Rentgeno spindulių difrakcijos analizei ir branduoliniam magnetiniam rezonavimui atlikti. Todėl antrinės struktūros modelis buvo skirtas E2 baltymo sutrumpintajai formai (ektodomenei), naudojant kompiuterines programas, kuriose prognozuojama baltymų lankstymas ir jau tirtų Flaviviridae šeimos apvalių baltymų lyginamoji analizė [112]. Ektodomenas yra E2 glikoproteino (aco 384-660) fragmentas be jo transmembranos dalies, turinčios daugybę biologinių savybių, būdingų pilno dydžio E2 baltymui. Jis gali sudaryti kompleksą su glikoproteinu E1, sąveikauti su monokloniniais antikūnais prieš E2 baltymo konformacinius epitopus, taip pat su heparinsulfatu ir kai kuriais ląstelių receptoriumi.

Šiame erdviniame E2 glikoproteino ektodomeno modelyje, kurį pasiūlė A.T. Yagnik ir jo bendraautoriai atskleidė, kad antrinės struktūros elementai yra mažai (apie 37%) ir sutrikdytų vietų paplitimas [113]. Antrinės struktūros elementus daugiausia sudaro beta sulankstytos sekcijos ir keletas trumpų alfa-spiralinių fragmentų. Tai pirmasis ir iki šiol vienintelis glikoproteino E2 modelis, kuris akivaizdžiai atspindi jo tikrąją antrinę struktūrą su tam tikra aproksimacija. Atsižvelgiant į šio modelio sudėtingumą ir dviprasmybę, jis nėra aiškiai atstovaujamas.

Viena iš pagrindinių E2 baltymo struktūros bruožų yra sekų su nepastoviu aminorūgščių sekos buvimu, kurie vadinami kintamaisiais ir hipervaribais [118, 119]. E2 baltymuose buvo nustatytos trys vietos, kuriose labai dažnas aminorūgščių pakaitalas: tai hipervaribuojami regionai (HWR). Pirmasis HVR yra lokalizuotas NH2 galinėje dalyje E2 baltymo vietoje su aminorūgščių likučių 384-411, antrasis HWR - vietoje su liekanomis 474-482 ir trečią, neseniai atrasta vietoje su 431-466 ar 434-450 liekanomis [120- 122].

Nustatyta, kad pirmoji HWR, nepaisant didelės aminorūgščių pakaitalų dažnumo, visada išlaiko bendrą teigiamą krūvį ir stabilų hidrofiliškumą / hidrofobiškumą.

Be to, jos keturios aminorūgšties liekanos 385, 389, 406 ir 409 vietose yra labai konservatyvios, t. Y. jie yra labai dažni tirtuose HCV izoliatuose [123, 124]. Visa pirmosios HWR aminorūgščių sekos variantų įvairovė gali būti sumažinta iki konsensuso seka, kuri susideda iš labiausiai paplitusių aminorūgščių liekanų kiekvienoje iš šios E2 baltymo dalies [27, 125] kiekvienos iš 27 pozicijų (384-411). Pirmasis HVR biologinis vaidmuo yra suteikti pradinius HCV sorbcijos etapus ant ląstelės paviršiaus ir pateikti "slankiojančią tikslą" imuninei sistemai, kuri susidaro nuolat keičiant naujus antigeninius šio E2 baltymo regiono variantus [31, 123, 126].

Yra įrodymų, kad antroji ir trečioji HVR dalyvauja HCV prijungimui prie ląstelių receptorių [121, 127].

Dėl visų trijų E2 glikoproteino hipervarifikuojamų sričių aminorūgščių kintamumo susidaro vadinamieji viruso evakuacijos variantai, t. Y. kurių imuninis atsakas šiuo metu nėra.

Kitas E2 ląstelės baltymo požymis yra polipeptidų grandinės vietų, panašių į kitus baltymus, buvimas.

Šis reiškinys vadinamas molekuline mimikija. Taigi, dvylika E2 baltymo konservatyvių aminorūgščių liekanų (660-671 padėtis) sudaro PEHD domeną, identišką fosforilinimo vietai ribosominio vertimo iniciacijos faktoriuje eIF2a [128]. Dėl to panašumo HCV gali sustabdyti IFN alfa antivirusinį poveikį. Įjungus alfa-interferoną, proteinkinazė R turėtų fosforilinti faktorių eIF2a, o tai savo ruožtu veda prie HCV RNR vertimo nutraukimo. Tačiau E2 baltymas, naudojant RephD sritį, sąveikauja su bifenilkinazės R vietoj eIF2a faktoriaus ir virusų baltymų biosintezė tęsiasi [129].

E2 baltymo NH2-terminalo dalyje buvo nustatyta molekulinė mimikija su lengvų ir sunkiųjų imunoglobulinų grandžių sritimis ir su T-ląstelių receptoriumi [118]. Manoma, kad šis struktūrinis panašumas gali būti autoimuninių sutrikimų vystymosi priežastis pacientams, užsikrėtusiems HCV, pvz., Mišraus II tipo krajoglobulinemijos ir B-ląstelių ne-Hodžkino limfomos [130].

Kaip jau buvo minėta, HCV apvalkalo baltymai užtikrina viruso sąveiką su ląstelių receptoriumi. Nustatyta, kad šių apvyniotų glikoproteinų oligosacharidų likučiai gali atlikti svarbų vaidmenį susiejant virusą su potencialiais jo receptoriais, tokiais kaip DC-SIGN (CD209), L-SIGN (CD209L) ir asialoglikoproteino receptoriais [117, 131, 132]. Pirmieji du potencialūs receptoriai yra C tipo lektinai ir veikia kaip paviršiaus rišančios molekulės, kurios sąlygoja koreliacinius ryšius tarp dendrito, endotelio ir T ląstelių. L-SIGN receptoriai yra ant kepenų ir limfmazgių sinusoidų endotelio ląstelių paviršiaus, o DC-SIGN yra ant dendritinių ląstelių paviršiaus. Šie receptoriai turi specialų kalciui priklausantį angliavandenių atpažinimo regioną (angliavandenių atpažinimo domenus), kuris gali susieti su E1 ir E2 baltymų angliavandenių likučiais [117, 131]. Kadangi DC-SIGN ir L-SIGN receptoriai nėra hepatocituose, jie negali būti laikomi pagrindiniais HCV tikslais. Šie receptoriai surenka, kaupia virusą ir perduoda jį T-ląstelėms ir, galbūt, hepatocitams.

Asialogliko proteino receptorius yra ant kepenų ląstelių paviršiaus ir užtikrina glikoproteinų skverbimąsi į juos, kurių angliavandenių grandinės pabaigoje nėra sialo rūgšties liekanų. Šis receptorius yra specifiškai susijęs su rekombinantiniais E1 ir E2 baltymais, gaunamais ekspresuojant atitinkamas HCV RNR fragmentus vabzdžių ląstelėse [132].

Nustatyta, kad rekombinantinis E2 baltymas sąveikauja su kitu galimu viruso receptoriumi (arba bendro receptoriumi), transmembraniniu baltymu CD81 [133]. Šis receptorius yra daugumos ląstelių paviršiuje (išskyrus eritromą ir trombocitus) ir yra susijęs su ląstelių funkcijomis, susijusiomis su sukibimu, judrumu, metabolizmo aktyvumu ir transformacija. CD81 priklauso tetraspanino baltymų grupei ir turi būdingą struktūrą: 4 transmembranos grandinės ir didelės ir mažos neakultūralios kilpos. Buvo įrodyta, kad didelė ekspresulinė kilpa CD81 specifiškai riboja rekombinantinį virusinį baltymą E2 [133].

Modelio A.T. Jagnikas ir jo bendraautoriai dalyvauja dviejuose E2 baltymo paviršiuose su aco 474-494 ir 522-551 [112]. Tačiau vėlesniame tyrime buvo nustatyta, kad E2 baltymo aminorūgščių likučiai 420, 527, 530 ir 535 padėtyse liečiasi su dideliu CD81 kilpa [134].

Eksperimentai su ŽPV, ŽPV ir grynuoju virusu sergančių pacientų su CHC serume patvirtino, kad CD81 dalyvauja HCV skverbimosi į ląstelę procese, bet be jo reikalingas kitas endokitozę stimuliuojantis baltymas [77, 78, 134]. Su CD81 ir šiuo baltymu, virusai, nesusiję su lipoproteinu, patenka į ląstelę, nes yra reikalingas viruso glikoproteino E2 ir CD81 kontaktas. Yra žinoma, kad tokių virionų kiekis yra apie 20% (žr. 1.2 skirsnį). Virionai, kurie nėra susieti su lipoproteinu, gali patekti į ląstelę palei šį būdą, nes HCV komplekso susidarymas su jais akivaizdžiai užkerta kelią E2 glikoproteino kontaktui su CD81 receptoriumi.

Iki 80% HCV yra užkrėstų žmonių kūne kompleksu su lipoproteinu (tai vadinamieji lipoviruso dalelės). Šios dalelės patenka į ląsteles, naudojant LDL receptorius (žr. 1.2 skyrių) ir kitą SR-BI receptorių (taip pat žinomą kaip Cla-1) [126]. SR-BI receptorius yra daugelio ląstelių paviršiuje, tačiau jo didžiausias kiekis yra kepenyse ir steroidogeniniuose audiniuose. Pagrindinė šio receptoriaus funkcija yra lipidų, sudarančių didelio tankio lipoproteinų į ląsteles, tiekimas. SR-BI receptorius reiškia transmembraninius baltymus. Jame yra dvi membranos gijos, didelė ekstraląstelinė linija ir dvi trumpos citoplazminės vietos NH2 ir COOH terminalų srityse [135]. Nustatyta, kad pirmasis HBR iš rekombinantinio E2 baltymo, HPV ir viruso, gauto iš ląstelių kultūros, gali būti susijęs su šiuo receptoriumi [136-138]. Tačiau hepatito C sergančių žmonių serumas HCV sąveikauja su SR-BI receptoriumi be pirmojo HWR ir E2 baltymų dalyvavimo [118].

Norėdami paaiškinti šį reiškinį, buvo pasiūlyta, kad virusas patenka į ląstelę, naudojant daugiakomponentinį receptorių kompleksą, kurį sudaro CD81 - SR-BI [77, 138].

Yra žinoma, kad neigiamai įkraunamos ląstelės paviršiaus glikoproteinų angliavandenių grandinės gali būti pagrindinės įvairių virusų susiejimo vietos [139]. Dėl šio proceso viruso kiekis ląstelių paviršiuje didėja ir jo sąveika su konkrečiu receptoriumi padidėja. Eksperimentai, susiję su HCV rišimu į hepatomų ląstelių kultūras, parodė, kad šis procesas gali būti blokuojamas heparinu ir suraminu, kurie turi neigiamą krūvį [140]. Vietovė, kurioje specifiškai jungiasi heparinu, yra lokalizuota pirmame E2 glikoproteino HVR ir / arba AKO 559-614 zonoje, kurioje buvo nustatytas didelis teigiamai įkrautų aminorūgščių likučių kiekis [112, 126]. Tačiau eksperimentuose su pseudovirusine HCV dalelėmis nebuvo įmanoma nustatyti E2 baltymo sąveikos su heparinu [141]. Akivaizdu, kad gliukozaminoglikanų įtraukimas į sudėtingą HCV patekimo į ląstelę procesą reikalauja tolesnio tyrimo.

Kaip rodo tyrimai per pastarąjį dešimtmetį, HCV yra platus akustinis tropizmas. Virusas replikuojasi hepatocitų, periferinė vienbranduolių ląstelių ir ascitas, limfos ir monocitų [142-144], dendritines ląsteles [52, 145], kraujodaros kamieninių ląstelių [146], [38] mikroglijai kardiomiocitų [147], žarnų epitelio [ 148], osteoblastai [149] ir limfmazgių b limfoliukai [150]. Tikriausiai dėl to yra daugiau nei vienas HCV receptorius.

Kiaulių baltymų tyrime daug dėmesio skiriama jų antigeninių ir imunogeninių savybių tyrimui, nes ši informacija yra būtina hepatito C vakcinų vystymuisi.

Nustatyta, kad glikoproteinai E1 ir E2 turi didelį imunogeniškumą. Taigi, imunizuojant šimpanzius su rekombinantiniais apvalkalo baltymais, buvo gauti konkretūs šių baltymų antikūnai, kurių titras buvo 1/819200 [15]. Tačiau, kai natūralus ūminis ir lėtinis hepatitas C sukelia žmonėms, humoralinis atsakas į E1 ir E2 virusinius glikoproteinus yra daug silpnesnis.

Pateikti duomenys apie linijinių B epitopų identifikavimą baltymuose E1 ir E2 pateikti lentelėje. 1. Tiriant šiuos epitopus, buvo naudojamas peptido nuskaitymas, fagų ekspozicija ir monokloniniai antikūnai. Peptidų nuskaitymo metodas pagrįstas sintetinių peptidų, apimančių visą baltymo aminorūgščių seką ir jų imunoreaktyvumą, t.y. gebėjimas sąveikauti su pacientų, sergančių hepatitu C, antikūnus. Pirmą kartą šis tyrimas HCV apvalkalo baltymų buvo atliktas "Chiron Corporation" (JAV) [151]. Vėliau 1997 m. Buvo paskelbti glikoproteinų E1 ir E2 peptido nuskaitymo rezultatai, kurių metu

Unikalūs serumai iš moterų, užsikrėtusių prieš 17 metų, su vienu HCV izoliatu, kuris užteršė anti-D imunoglobulino preparatą, buvo naudojami [152].

Dėka trijų mokslinių tyrimų grupių, vadovaujamų J. Dubuisson, M. Flint ir A.H. Patel sukūrė HCV ir žmogaus monokloninių antikūnų (MCA) banką, su kuriuo buvo įmanoma identifikuoti kai kuriuos E1 ir E2 apvalkalo baltymų linijinius ir konforminius B epitopus [79, 109, 153-155].

Pav. 8 parodytas E2 glikoproteino B epitopų išdėstymas, kurį identifikuoja ICA.

Ypatingas dėmesys skiriamas B epitopams, antikūnų, su kuriais susidaro virusas, neutralizavimu. Toks neutralizuojantis epitopas buvo aptiktas pirmame E2 baltymo HWR [156].

Kitas epitopas, neutralizuojantis viruso susirišimą su ląstelėmis (vadinamasis NOB epitopas nuo rišamosios medžiagos neutralizavimo), buvo

Pav. 8. B-epitopų, identifikuotų naudojant ICA E2 baltymuose, vieta.

Schema yra pateikiama su nežymiais pokyčiais R.F. Clayton ir kt. [79] ir A. M. Owsianka ir kt. [155].

Viršuje stačiakampiai žymi ICA, kuris atpažįsta E2 baltymo, pilno dydžio E2 baltymo kartu su E1 ir E2 baltymu ekvodominą ŽPV. Apatinis paviršius rodo, kad ICA sąveikauja su E2 baltymo ectodomainu arba su pilno dydžio E2 baltymu kartu su E1 baltymu. Juodoje ICA yra izoliuota, kuri slopina CD81 ektodomino E2, viso ilgio E2 baltymo ir E1 ir ŽPV, susiejimą. ICA, slopinantis ŽPV prisijungimą prie CD81, yra pažymėtas pilka spalva.

konforminė struktūra, kurios formavime, atsižvelgiant į vienos autorių grupės prielaidą, dalyvauja E2 baltymo [76, 156, 157] sekos 406-644 aminorūgščių liekanos, o pagal kitas 414-443 ir 490-519 sekų liekanas [158 ]

Parodyta, kad aminorūgščių likučių iš 3 vietų gali susidaryti dar vienas sudėtingesnis konforminis B epitopas, kuris neturi neutralizuojančių savybių:

E2 baltymo E1 baltymo, 480-494 ir 613-621 297-306 [167].

E1 ir E2 glikoproteiniuose identifikuoti T-helper (CD4 +) ir T-killer (CD8 +) epitopai (2 lentelė).

Šiuo metu vyksta tyrimai dėl lokalizacijos ir struktūros B ir T epitopų HCV apvalkalo baltymų. Informacija apie šią temą pateikta Los Alamos nacionalinės laboratorijos (JAV) tinklalapyje: http://hcv.lanl.gov.

* Jei epitopui nustatyti buvo naudojami 20-osios peptidai, tada nėra tikslios lokalizacijos.

2.2. Nukleokapsidinis antigenas. Polikvodilio nukleokapsidinio baltymo lokalizacijos schema (sinonimai: šerdis, šerdis) parodyta fig. 1. Šis baltymas yra susijęs su svarbiais viruso morfogenezės etapais: jis formuoja virusinį nukleokapsidą, inicijuoja HCV RNR pakuotę ir viruso paketo surinkimą [74, 178, 179].

Pagrindinis baltymas tikriausiai turi kitas biologines funkcijas. Tokiu būdu, įvairių modelio eksperimentų rodo, kad ji sąveikauja su reguliavimo baltymų ir tam tikrų struktūrinių elementų ląstelių: baltymų p53 [179], pirmojo receptorius auglio nekrozės faktoriaus [180] receptoriaus limfotoksino-beta [181], transkripcijos LZIP faktorius [182 ], STAT3 baltymų (kuris pagerina transkripcijos signalą) [183], nevienalytė branduolinės ribonucleoprotein K [184] helikazės DDX3 [185] Citoplazmos trigliceridų pūslelės [186], Mitochondrija [187] citokeratino ląstelės [188]. Manoma, kad Corbeloc dalyvauja steatozės ir hepatokarcinogenizmo vystyme pacientams, sergantiems lėtiniu hepatitu C [179, 186].

Pirminis baltymas yra tarp visų virusų baltymų biosintezės procese, jis yra suskaidytas iš poliproteino, naudojant ląstelės signalo peptidazių [190]. Galutinėje proteolitinės bazės baltymo hidrolizėje dalyvauja neseni atpažįstamas signalo peptidų-peptidazės SPP, atliekantis neįprastą intramembraninį skilimą [189, 190].

Nukleozidino baltymo apdorojimas lydimas p23 formos (193 ako) iki p21 (173 aco) ir serijos likučių fosforilinimo OH grupėmis [189]. Skaldytuose plotuose (174-193 aco) atliekamas translokacijos signalas, dėl kurio E1 baltymo NH2 galinė dalis patenka į EPR talpyklas [191].

Brandaus baltymo forma turi aiškiai apibrėžtą amfipatinę struktūrą: hidrofilinę NH2-galinę sritį ir hidrofobinę COOH-galinę sritį [192]. Atitinkamai D1 (hidrofilinis) domenas ir D2 domenas (hidrofobiniai) yra išskirti baltymui. Panaši struktūra būdinga Flaviviridae šeimos nukleokapsidų baltymams. Kartais trečioji sritis (centrinė), turinti neįprastai didelį triptofano likučių kiekį, taip pat izoliuota šerdies baltymėje [46].

Hidrofilinis domenas D1 turi RNR prisijungimo vietą, pagrindines konservatorius B epitopus ir fragmentą, atsakingą už bazinio baltymo dimero susidarymą [192]. Funkciniu požiūriu aktyvi nukleokapsido baltymo forma yra sudaryta iš dviejų polipeptidų grandinių, t. Y. Pagrindinis baltymas yra dimeris, kuriame vyrauja alfa-spiralės struktūrinė organizacija. Hidrofobiniame domeno D2, kuris palaiko ryšį su citoplazmos membranomis ir lipidų intarpais, randami amfipatiški alfa spelonai su ryškiais hidrofiliniais ir hidrofobiniais paviršiais.

Tarp visų virusinių baltymų pagrindiniam baltymui būdingas didžiausias konservatyvių zonų kiekis pirminėje struktūroje [193].

Pagrindinių funkciniu požiūriu svarbių nukleokapsidinio baltymo regionų išdėstymas parodytas Fig. 9. šių svarbiose srityse reikia pažymėti, regionas armatūra baltymą su aminorūgščių liekanų 72-91, kuris sąveikauja su apvalkalo baltymo E1 [194] dalį su likučių 69-104 siekiant išsaugoti infekciškumo HCV [195] zona 65 liekanų -72, kuris anksčiau viruso morfogenezėje gali kontaktuoti su p7 peptidu [195].

Remiantis elektronų mikroskopijos duomenimis, šerdies baltymas yra lokalizuotas EPR membranose esančioje ląstelėje, citoplazmoje esančių lipidinių pūslelių ir branduolio. Pagrindinio baltymo perkėlimas į ląstelės branduolį vykdomas biparnino NLS ląstelių transportavimo baltymu, kuris sąveikauja su specialia signaline seka esant šerdies baltymui [196].

Gyvojo nukleokapsido iš serumo ir jo analogų, gautų naudojant HCV replikonus, tyrimas parodė, kad nepriklausomai nuo jų kilmės, jų sedimentacijos koeficientas yra apie 100 S, slankiojo tankio gradientas

Pav. 9. Pagrindinių funkciniu požiūriu svarbių nukleokapsido baltymų vietų išdėstymas pateikiamas su nedidelėmis C.L. modifikacijomis. Murray ir kt. [195].

Iš skaitmenų apačioje pažymėti aminorūgščių likučių skaičiai.

cezis yra 1,28 g / ml, o skersmuo - 33-46 nm, nustatomas naudojant perdavimo mikroskopą [197, 198]. Remiantis elektroninės mikroskopinės analizės duomenimis apie žmones, sergančius lėtiniu hepatitu C, kepenų biopsijos egzempliorių, buvo nustatyta, kad viruso nukleokapsido dydis šiuo atveju intensyviau svyruoja: nuo 28 iki 48 nm [198].

Esminis baltymas yra vienas iš labiausiai imunogeninių HCV antigenų. Duomenys apie B ir T epitopus pateikti lentelėje. 3 ir 4.

Reikėtų pažymėti, kad nukleokapsido baltymo B epitopai daugiausia koncentruojami hidrofiliniame domene ir konservuotiems regionams.

2.3. NS2 baltymo apibūdinimas NS2 baltymas yra nekonstrukcinis HCV baltymas, po p7 peptido jis yra poliproteinyje (žr. 1 pav.). NS2 baltymas yra apie 23 kDa, neturi angliavandenių likučių ir yra susijęs su EPR membranomis [206, 207]. Tiksli baltymo topografija membranoje nenustatyta, daroma prielaida, kad ji sudaro 3 transmembranines sritis (žr. 5 pav.) [90]. NS2 baltymas yra mažai tirpus, todėl sunku jį tirti.

Pagrindinė biologinė NS2 baltymo funkcija yra HCV serino proteazės pašalinimas. Jo vykdymui NS2 baltymas sudaro kompleksą, kurio poliproteino vieta atitinka NS3 baltymą [206, 208].

"Kazanė (Volgos regiono) Federalinės universiteto mokslinė biblioteka. N.I. Lobachevskis. Naujos knygos įrašai į Fondo nacionalinį banką nuo 2015 m. Birželio 27 d. Iki rugsėjo 4 d., Kazanė. Įrašyta RUSMARC formatu naudojant "Ruslano AIS". Medžiaga išdėstyta sistemingai pagal žinių šakas, skyriuose - autorių ir pavadinimų abėcėlėje. Knygos viršelis, santrauka ir turinys yra elektroniniame kataloge. Nežinomas pavadinimas. Visos konferencijos medžiaga. "

"MINISTERIJA ŠVIETIMO IR MOKSLO RUSIJOS FEDERACIJOS federacinė valstybė švietimo įstaiga aukštojo profesinio mokymo" Tiumenė valstybinis universitetas "Biologijos institutas, Ekologijos katedros ir genetikos, ON Zhigileva EKOLOGINĖ PARASITOLOGIJA Švietimo ir metodikos kompleksas. Darbų programa studentams mokymo kryptimi 06.03.01 Biologija (bakalauro laipsnis), mokymo profiliai "Bioekologija", dieninių studijų Tiumenė narė. "

"RUSIJOS FEDERACIJA ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRAS Valstybinė aukštojo profesinio rengimo įstaiga TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS Biologijos institutas Gyvulininkystės zoologijos ir evoliucinės ekologijos katedra A.V. Tolstikov, V.A. Stolbovo ENTOMOLOGIJA Švietimo ir metodikos kompleksas. Studentų darbo programa mokymo kryptimi 35.03.10 Kraštovaizdžio architektūra, mokymo profilis Dekoratyvinių augalų auginimas ir daigynai, dieninių studijų Tiumenė. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRIJA Federalinės biudžeto biuro aukštojo profesinio mokymo įstaiga" TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS "Biologijos institutas Anatomijos ir gyvūnų ir gyvūnų fiziologijos katedra Lepunova O. N. ŽMONIŲ ANATOMIJA IR MORFOLOGIJA Švietimo-metodinis kompleksas. Darbų programa studentams 06.03.01 sritys "Biologija", profiliai: botanika, zoologija, fiziologija, genetika, bioekologija, biochemija; švietimo forma. "

"Savivaldybės" Bezhanitsy rajonas "savivaldybių biudžeto bendrojo lavinimo įstaigos" Bezhanitsky VIDURINĖ MOKYKLA "sutarta patvirtinti metodinę tarybą №1 Pagrindiniai protokolai 08.27.2014 _ / SK Michhejevas 2016 m. Rugpjūčio 29 d. Įsakymas Nr. 71 DARBO PROGRAMA MOKYMO TIKSLINĖS BIOLOGIJOS pagrindinio bendrojo lavinimo mokykloje, 6-oji klasė 2014-2015 mokslo metams. Mokytojas Vasiljeva Irina Bezhanitsy 2014 1. Išsiaiškinti biologijos darbo programą atitinka federalinė. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŽEMĖS ŪKIO MINISTERIJA Valstybinė biudžetinė švietimo įstaiga aukštojo profesinio mokymo" KUBAN VALSTYBINIS AGRARIJOS UNIVERSITETAS "Mikrobiologijos, epizootologijos ir virusologijos katedra METODOLOGINIAI INSTRUKCIJOS dėl: mokymas 36.06.01 Veterinarijos ir gyvulininkystės technologijos, dėmesys: "Veterinarinė mikrobiologija, virusologija. "

"Ministerija Švietimo ir mokslo Kalugos regione Valstybės biudžetinė įstaiga papildomo ugdymo Kalugos regione" regioninės ekologinius ir biologinius centro "generalinis vidurinė bendrojo raidos programa" Pantry gamtos "studentams pradinės mokyklos amžiaus (7-11 metų) įgyvendinimo laikotarpis -2 metų parengė mokytojai papildomo ugdymo : Timoshina E.V. Glebova S.V. Kalugos turinys Paaiškinimas Programos aktualumas: programos tikslai ir uždaviniai. "

" TEORINĖS MECHANIKOS "2012-2013 metų mokslo metų 1-ojo semestro praktinių praktinių praktinių praktinių užsiėmimų gairės 2-ąjį Medicinos ir biologijos fakultetą specialybė 201000 - Biotechnikos sistemos ir technologijos 1. Įvadinė pamoka. Judėjimo lygtys ir taško trajektorijos lygtys. Spręskite šias užduotis: 1. Pagal taško judesio lygtį suraskite jo trajektorijos lygtis koordinačių formoje ir nurodykite judėjimo kryptį paveiksle: 1) x = 3t -5, y = 4 - 2t; 2) x = 2t, y = 8t2; 3) x = 3t2, y = 4t2; "

«Http://www.bio.bsu.by/zoology/shalapyonok_ru.phtml Puslapis 1 Spausdinti svetainė Biologijos spausdinimo versija fakulteto arba grąžinti Shalapenok Elena Semenovna Personalo skyrius zoologijos Biologinės fakulteto BSU. Zoologijos katedros specialistas Mokymo personalas Švietimo pagalbinis personalas Mokslininkų padėjėjai Doktorantai ir studentai Elena Šalapenokas (1931-2010) Zoologijos mokslų daktaras, daktaras, docentas Baltarusijos absolventas. "

"Pensijų valstybinio universiteto Švietimo ir mokslo ministerija pritariu: rektorius - A.D. Gulyakov '' _ 201, registracijos numeris intrahigh pagrindinių profesinių mokymo programų aukštojo mokslo kryptis paruošimas 020 400 biologijos profilis Bioecology mokymo kvalifikacijos (laipsnis) absolventas bakalauro studijų forma Dieninis Penza, 2013 TURINYS 1 apskritai. 1.1. Aukštojo mokslo pagrindinė profesinio mokymo programa. "

"Anotacija į šios temos darbo programą" Biologija "2014-2015 mokslo metų 9 klasė Darbo programos tikslas - sudaryti sąlygas studijų proceso planavimui, organizavimui ir valdymui dalyko biologijoje į skyrių" Bendrosios biologijos pagrindai ". Darbo programa apima šiuos skyrius: Skyrius 1. Aiškinamoji pastaba, kurioje nurodomi bendri bendrojo lavinimo tikslai, atsižvelgiant į akademinio dalyko ypatumus. Darbo programa yra pagrįsta apytikrine pagrindinės programos programa. "

"MINISTERIJA ŠVIETIMO IR MOKSLO RUSIJOS FEDERACIJOS federacinė valstybė švietimo įstaiga aukštojo profesinio mokymo" Tiumenė valstybinis universitetas "Biologijos institutas, Ekologijos katedros ir genetikos, ON Zhigileva EKOLOGIJOS PAGRINDAI Švietimo ir metodikos kompleksas. Darbo programa studentams mokymo kryptimi 42.03.02 Žurnalistika (bakalauro laipsnis), mokymo profiliai "Spausdinti", "Televizijos žurnalistika", "Konvergencing žurnalistika". "

"RUSIJOS FEDERACIJA ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRAS Federalinės biudžeto biuro aukštojo profesinio mokymo įstaiga TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS Biologijos institutas Botanikos, biotechnologijos ir kraštovaizdžio architektūros katedra Marina Semenova Biologinis kompozicijos pagrindas su augalais Švietimo metodikos kompleksas Darbų programa kryptims studentams 35.03.10 Kraštovaizdžio architektūros profilis Kraštovaizdžio sodyba ir kraštovaizdis. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRIJA Federalinė valstybinė aukštojo profesinio rengimo įstaiga TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS Biologijos institutas Botanikos, biotechnologijos ir kraštovaizdžio architektūros katedra Belozerova A. A. Darbo programa studentams kryptimis 35.03.10 Kraštovaizdžio architektūra dieninio mokymo forma Dekoratyviniai dekoratyviniai ir. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRIJA Federalinės valstybinės biudžeto aukštojo profesinio mokymo įstaiga" TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS "institutas Zoologijos ir ekologijos katedra Ekologija O. A. Aleshina PAGRINDINIS BENDROJI ŠVIETIMO BIOLOGINĖ PRAKTIKA: NEKILNOJAMOJO ŽMONĖS ZOOOLOGIJA Švietimo ir metodikos kompleksas. Darbo programa studentams mokymo kryptimi 06.03.01 - "Biologija" (akademinis bakalauro laipsnis), mokymo profilis. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTRIJA Federalinės biudžeto biuro aukštojo profesinio mokymo įstaiga" TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS "Biologijos institutas Anatomijos ir gyvūnų ir gyvūnų fiziologijos katedra Lepunova O. N. VIRUSŲ IR KITŲ INTRACELLULINIŲ PARAZITŲ MOLEKULINĖ BIOLOGIJA Švietimo metodikos kompleksas. Darbų programa studentams 06.03.01 kryptis "Biologija", profilis: biochemija; studijų forma - dieninė Tiumenė. "

"Federalinė medicinos ir biologijos agentūra" FEDERALINĖS VALSTYBĖS BIUDŽETO SVEIKATOS INSTITUCIJA. "

"RUSIJOS FEDERACIJOS ŠVIETIMO IR MOKSLO MINISTERIJA Aukštojo profesinio rengimo federalinė valstybinė švietimo įstaiga TYUMENO VALSTYBINIS UNIVERSITETAS Biologijos institutas Botanikos, biotechnologijų ir kraštovaizdžio architektūros katedra S.P. Arefev MOKESČIAI Švietimo ir metodikos kompleksas. Darbo programa studentams kryptimi 35.03.10 Kraštovaizdžio architektūra dieninės profsąjungos profilio Dekoratyvinių augalų auginimas ir medelynai Тюменский valstybinis universitetas. "

"Tolimųjų Rytų valstybinis universitetas V. V. Iz sinergetikos biologija Įvadinis Vadovėlis Vladivostokas darbaknygė yra sudarytas remiantis paskaitų studentams ląstelių biologijos departamento Tolimųjų Rytų valstybinio universiteto, skaityti autoriaus kelerius metus pagrindu ir yra pritaikytas biologų, supaprastinta ir iliustruoti pagrindinius idėjas netiesinio mokslo (dažnai vadinamas sinergija), įskaitant teorijas apie bifurkacijas ir. "

"SAVININKYSTĖS BIUDŽETO UGDYMO INSTITUCIJA" VIDURINĖ MOKYKLA №18 "Susitikimas" Susitarta " Patvirtinta "ŠMM Gamtos mokslų direktoriaus pavaduotojas MBOU" 18-oji vidurinė mokykla "Leader T.I. Antonovičius UVR LA Ishutin V.N. 2014 m. Gegužės 23 d. Nikitinos protokolas Nr. 1. BIOLOGIJOS ŠVIETIMO PROGRAMA 5 9 KLASĖ (GEF) Abakanas Paaiškinimas Ši biologijos programa pagrįsta federaliniu valstybiniu švietimo standartu. "


Susiję Straipsniai Hepatito